Анц

Идентификация вещества

МУРАВЬИ (ANTS) — 8-амино-1,3,6-нафталинтрисульфонат натрия, водорастворимый флуоресцентный краситель. Английское название ANTS, CAS 5398-34-5, химическая формула C10H9NO9S3·2Na. Раздел классификации — амиды.

Синонимы

• 8-Амино-1,3,6-динатриевая соль нафталинтрисульфоновой кислоты
• 8-амино-1,3,6-нафталинтрисульфонат натрия
• 1-аминонафталин-3,6,8-трисульфонат натрия

Физико-химические свойства

Дианионный (динатриевый) флуоресцентный краситель на основе нафталинового ядра с аминогруппой и тремя сульфогруппами, две из которых образуют натриевые соли. Отличительная особенность — аномально высокий стоксов сдвиг в воде (более 150 нм), выделяющий сигнал красителя на фоне собственной автофлуоресценции биологических образцов. Свободная аминогруппа способна реагировать с альдегидными и кетонными группами с образованием нестабильного основания Шиффа, что используется при конъюгации красителя с другими молекулами.

Назначение

ANTS применяется как флуоресцентная метка при изучении проницаемости мембран и лизиса липосом, в том числе в комбинации с катионным гасителем DPX (парадиметиламинофенилпиридиний) для анализа слияния мембран и проницаемости, включая опосредованный комплементом иммунный лизис клеток. Реагент загружают в крупные однослойные везикулы (LUV) методом гидратации с мини-экструзией — типичный рабочий раствор содержит 25 мМ ANTS в 100 мМ растворе нитрата натрия при pH 7,0. Дополнительно ANTS используется для изучения проницаемости гематоэнцефалического барьера для полисахаридов благодаря высокой чувствительности флуоресцентного детектирования и устойчивости сигнала в физиологических средах.

Принцип метода ANTS/DPX

В классическом варианте эксперимента флуорофор ANTS и гаситель DPX инкапсулируют совместно внутри липосом в концентрациях, при которых флуоресценция ANTS частично подавлена за счёт близкого контакта с гасителем. При слиянии липосом с немечеными мембранами или при повреждении бислоя происходит разбавление содержимого везикул, расстояние между ANTS и DPX увеличивается, и интенсивность флуоресценции возрастает пропорционально степени слияния или проницаемости мембраны. Такой подход позволяет количественно оценивать кинетику мембранных процессов в реальном времени с помощью флуориметра или планшетного ридера.

Дополнительные области использования

Помимо липосомальных исследований, реагент применяется при разработке методов прямого мечения нуклеотидов и в скрининговых системах для оценки мембраноактивных соединений, включая антимикробные пептиды и порообразующие токсины, действие которых можно количественно охарактеризовать по кинетике выхода ANTS/DPX из везикул. Полианионная природа молекулы делает её устойчивой к неспецифическому связыванию с белками, что снижает фоновый сигнал при работе со сложными биологическими образцами.

Хранение и обращение

Хранить в герметичной таре, в сухом прохладном месте, защищённом от света и влаги, желательно в холодильнике. Рабочие растворы для липосомальных экспериментов готовят непосредственно перед использованием. При работе с сухим веществом использовать перчатки и защитные очки, избегать образования пыли.